細胞凍存液是利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來，這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種，起到了細胞保種的作用。除此之外，還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞。
細胞凍存液的操作步驟：
(一)細胞凍存
1. 配制含10%DMSO或甘油、10~20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液;
2. 取對數(shù)生長期的細胞，用胰蛋白酶把單層生長的細胞消化下來，懸浮生長的細胞則直接將細胞移至15ml離心管中;
3. 離心1000rpm，5min;
4. 去除胰蛋白酶及舊的培養(yǎng)液，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的zui終密度為5×106/ml~1×107/ml;
5. 將細胞分裝入凍存管中，每管1~1.5 ml;
6. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者;
7. 凍存:標準的凍存程序為降溫速率-1~-2℃/ min;當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。
(二) 細胞復蘇
1. 從液氮容器中取出凍存管，直接浸入37℃溫水中，并不時搖動令其盡快融化。
2. 從37℃水浴中取出凍存管，打開蓋子，用吸管吸出細胞懸液，加到離心管并滴加10倍以上培養(yǎng)液，混勻;
3. 離心， 1000rpm，5min;
4. 棄去上清液，加入含10%小牛血清培養(yǎng)液重懸細胞，計數(shù)，調(diào)整細胞密度，接種培養(yǎng)瓶，37℃培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng);
5. 次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)。
